一 流動相在液相色譜中扮演的角色
目標化合物在液相色譜中的保留取決于該物質(zhì)與流動相和固定相間的作用強度。流動相是整個液相色譜分離過程中的“血液”，它對組分有親和力，并參與固定相對組分的競爭，因此流動相的選擇直接影響組分的分離度。
二 流動相選擇原則
1 適用性
用作流動相的溶劑應(yīng)與固定相不相溶，并能保持色譜柱的穩(wěn)定性。
2 純度
流動相所用溶劑應(yīng)有高純度，以防流動相中的雜質(zhì)在色譜柱上積累，致使柱性能下降。
3 檢測背景值
如使用紫外檢測器時，所用流動相在檢測波長下應(yīng)沒有吸收或吸收很小;當使用示差檢測器時，應(yīng)選擇折射率與樣品差別較大的溶劑作為流動相。
4 粘度與沸點
溶劑的粘度和沸點要適當。
使用低粘度溶劑可以減少溶質(zhì)的傳質(zhì)阻力，有利于提高柱效，但如醚類等溶劑也不宜使用，因為粘度過低的溶劑容易在色譜柱或檢測器內(nèi)形成氣泡，影響分離。而粘度高溶劑會影響溶質(zhì)的擴散、傳質(zhì)，降低柱效，還會使柱壓升高，分離時間延長。
對于制備和純化樣品所用的流動相最好選用沸點較低的溶劑，這樣易用蒸餾等方法把溶劑從柱后收集液中去除，有利于樣品的純化。
5 對樣品的溶解度
如果流動相對樣品的溶解度較差，樣品會在色譜柱柱頭沉積，導致柱效下降。
6 毒性
應(yīng)盡量避免使用具有顯著毒性的溶劑，減少環(huán)境污染和確保實驗人員的安全。
三 常用的流動相
反相色譜是大多數(shù)樣品分析的分離模式，該模式的普適性更好、更方便、更容易獲得令人滿意的分離效果。在反相色譜中，一般使用非極性/弱極性鍵合固定相色譜柱，如C18柱、苯基柱等。
流動相的選擇通常以水相(包括加入一定量的酸、堿、無機鹽緩沖液等)做基礎(chǔ)溶劑，再加入一定量的能與水互溶的如甲醇(質(zhì)子給體)、乙腈(質(zhì)子受體)、四氫呋喃(偶極溶劑)等極性溶劑，其極性及其K值(分配系數(shù))和分離選擇性有顯著影響。
四 試劑純度、高純HPLC溶劑
溶劑的低含水量以及低固體微粒等特點有助于保護昂貴的液相色譜柱。
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