脯氨酸(茚三酮法)
當(dāng)用磺基水楊酸提取植物樣品時(shí)，脯氨酸便游離于磺基水楊酸溶液中，然后用酸性茚三酮加熱處理后，茚三酮與脯氨酸發(fā)生反應(yīng)，溶液變?yōu)榧t色，再用甲苯處理，則色素全部轉(zhuǎn)移至甲苯中，色素的深淺即表示脯氨酸含量的高低。在λ 520 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出脯氨酸的含量。
可溶性糖(蒽酮法)
糖(sugar)在濃硫酸作用下，可經(jīng)脫水反應(yīng)生成糠醛或羥甲基糠醛，生成的糠醛或羥甲基糠醛可與蒽酮反應(yīng)生成藍(lán)綠色糠醛衍生物，在一定范圍內(nèi)，顏色的深淺與糖的含量成正比，故可用于糖的定量測(cè)定。該法幾乎可以測(cè)定所有的碳水化合物，不但可以測(cè)定戊糖與己糖含量，而且可以測(cè)所有寡糖類(lèi)和多糖類(lèi)，其中包括淀粉、纖維素等(因?yàn)榉磻?yīng)液中的濃硫酸可以把多糖水解成單糖而發(fā)生反應(yīng))，所以用蒽酮法測(cè)出的碳水化合物含量，實(shí)際上是溶液中全部可溶性碳水化合物總量。糖類(lèi)與蒽酮反應(yīng)生成的有色物質(zhì)在λ 620 nm處有最大吸收峰，故在此波長(zhǎng)下進(jìn)行比色。
可溶性蛋白(考馬斯亮藍(lán)法)
考馬斯亮藍(lán)G-250法(Coomassie brilliant blue，G-250)是一種利用蛋白質(zhì)-染料結(jié)合的原理，定量測(cè)定微量蛋白質(zhì)濃度的快速、靈敏的方法?？捡R斯亮藍(lán)G-250存在著兩種不同的顏色形式，紅色和青色。該染料在游離狀態(tài)下為紅色，在酸性溶液中可與蛋白質(zhì)的疏水區(qū)結(jié)合，顏色由紅色轉(zhuǎn)變成青色，其最大光吸收由λ 465 nm變成λ 595 nm。在一定蛋白質(zhì)濃度范圍內(nèi)(1-1000μg)，蛋白質(zhì)-染料復(fù)合物在λ 595 nm下的吸光度與蛋白質(zhì)含量成正比。蛋白質(zhì)和染料結(jié)合是一個(gè)很快的過(guò)程，約2 min即可反應(yīng)完全，呈現(xiàn)最大光吸收，并可穩(wěn)定1 h，之后蛋白質(zhì)-染料復(fù)合物發(fā)生聚合并沉淀出來(lái)。
超氧物歧化酶SOD(NBT法)
超氧物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)普遍存在于動(dòng)、植物體內(nèi)，是一種清除超氧陰離子自由基(O2·-)的酶。本項(xiàng)目依據(jù)SOD抑制氮藍(lán)四唑(NBT)在光下的還原作用來(lái)確定酶活性大小。在有氧化物質(zhì)存在下，核黃素可被光還原，被還原的核黃素在有氧條件下極易再氧化而產(chǎn)生O2·-，可將氮藍(lán)四唑還原為藍(lán)色的甲腙，后者在560nm處有最大吸收。而SOD可清除O2·-，從而抑制了甲腙的形成。于是光還原反應(yīng)后，反應(yīng)液藍(lán)色愈深，說(shuō)明酶活性愈低，反之酶活性愈高。據(jù)此可以計(jì)算出酶活性大小。
過(guò)氧化物酶(愈創(chuàng)木酚法)
在過(guò)氧化物酶(peroxidase，POD)催化下，雙氧水(H2O2)將愈創(chuàng)木酚氧化成茶褐色產(chǎn)物，此產(chǎn)物在λ 470 nm處有最大吸收峰，故可以通過(guò)測(cè)其吸光度的變化測(cè)定過(guò)氧化物酶的活性。
過(guò)氧化氫酶CAT(紫外法)
過(guò)氧化氫酶(catalase，CAT)是一種廣泛存在于生物組織中的氧化還原酶，它能催化過(guò)氧化氫(H2O2)分解為水和氧氣，清除組織中的過(guò)氧化氫。H2O2在λ 240 nm處有一個(gè)吸收高峰，其吸光度與H2O2的含量成正比，過(guò)氧化氫酶能分解H2O2，使反應(yīng)溶液吸光度A240隨反應(yīng)時(shí)間而降低。單位時(shí)間內(nèi)吸收的差值就是過(guò)氧化氫酶的活性。
丙二醛
丙二醛(malondialdehyde，MDA)是常用的膜脂過(guò)氧化指標(biāo)，在酸性和高溫條件下，可與TBA反應(yīng)生成紅棕色的三甲川，在 λ 532 nm 處有最大吸收，在 λ 600nm 處有最小吸收。但是測(cè)定植物組織中MDA時(shí)受多種物質(zhì)的干擾，其中最主要的是可溶性糖，糖與TBA顯色反應(yīng)產(chǎn)物在 λ 450nm處有最大吸收，在 λ 532nm也有吸收，因此測(cè)定植物組織中丙二醛與TBA反應(yīng)產(chǎn)物含量時(shí)一定要排除可溶性糖的干擾。
科米代謝葉綠素、類(lèi)胡蘿卜素、淀粉、還原糖、淀粉酶等指標(biāo)持續(xù)更新中......
