色譜柱按用途可分為分析型和制備型兩類， 尺寸規(guī)格也不同： ①常規(guī)分析柱(常量柱)，內(nèi)徑 2~5mm(常用 4.6mm)， 柱長(zhǎng) 10~30cm; ②窄徑柱(narrow bore，又稱細(xì)管徑柱、 半微柱 semi-microcolumn)， 內(nèi)徑 1~2mm， 柱長(zhǎng) 10~20cm; ③毛細(xì)管柱(又稱微柱 microcolumn)， 內(nèi)徑 0.2~0.5mm; ④半制備柱， 內(nèi)徑>5mm; ⑤實(shí)驗(yàn)室制備柱， 內(nèi)徑 20~40mm， 柱長(zhǎng) 10~30cm; ⑥生產(chǎn)制備柱內(nèi)徑可達(dá)幾十厘米。柱內(nèi)徑一般是根據(jù)柱長(zhǎng)、填料粒徑和折合流速來(lái)確定，目的是為了避免管壁效應(yīng)。
常見(jiàn)的分配柱填料： 碳十八柱 (ODS/C18)、 碳八柱(MOS/C8)、 碳六柱(Hexyl/C6)、碳四柱(Butyl/C4)、 碳一柱(Methyl/C1)、 陰離子交換柱(SAX)、陽(yáng)離子交換柱(SCX)、 苯基柱(Phenyl)、 氨基柱(Amino/NH2)、氰基柱(Cyano/CN/Nitrile)
常見(jiàn)的吸附柱填料： 硅膠柱
色譜柱的安裝
1、 首先應(yīng)確認(rèn)柱和儀器的接頭以及管路是否匹配。為減少死體積、進(jìn)樣閥、 柱子、檢測(cè)器之間的連接管路內(nèi)徑盡可能使用內(nèi)徑較小的管線，同時(shí)控制進(jìn)樣器、色譜柱和檢測(cè)器之間連接管線的長(zhǎng)度。安裝色譜柱之前，確認(rèn)流路系統(tǒng)中的溶劑是否正常。對(duì)分析較復(fù)雜的樣品建議安裝保護(hù)柱。
2、 為了使色譜柱與儀器系統(tǒng)達(dá)最佳的連接效果，應(yīng)盡量使用與色譜柱接口相匹配的螺帽和錐形接頭，如原來(lái)的接頭長(zhǎng)期匹配其他類型的色譜柱，建議在連接新色譜柱前應(yīng)檢查匹配情況，避免造成色譜柱的損壞或因色譜柱不匹配造成的漏液。
3、 使用 PEEK 材料的通用接頭，只需用手?jǐn)Q緊不需要特定扳手，使用壓力為 5000psi；使用溫度不得超過(guò) 80℃。
流動(dòng)相的選擇
1、 在進(jìn)行樣品檢測(cè)前， 至少使用 20 倍柱體積流動(dòng)相使色譜柱充分平衡。 流動(dòng)相一定要使用色譜級(jí)別的溶劑。 如使用水相的緩沖液應(yīng)當(dāng)天配制以保持新鮮避免細(xì)菌產(chǎn)生。
2、 流動(dòng)相使用前需用微孔濾膜過(guò)濾,消除流動(dòng)相中顆粒對(duì)色譜系統(tǒng)和色譜柱的損壞。緩沖液與其他流動(dòng)相混合后應(yīng)重新過(guò)濾避免溶解度變化造成產(chǎn)生新的沉淀。不應(yīng)使用純水作為流動(dòng)相沖洗 C18 色譜柱， 以免柱性能損壞。添加 5%-10%的有機(jī)溶劑沖洗色譜柱，同時(shí)可以達(dá)到對(duì)緩沖鹽清洗的作用，還可以使色譜柱更容易平衡。
3、 流動(dòng)相需脫氣后使用， 可避免因氣泡導(dǎo)致的泵和檢測(cè)器的工作不正常。 如果測(cè)試時(shí)使用的流動(dòng)相與色譜柱保存使用的流動(dòng)相有較大區(qū)別， 應(yīng)該使用過(guò)度分布的形式進(jìn)行平衡。避免由于流動(dòng)相的突然變化造成柱壓增加過(guò)大或流動(dòng)相緩沖鹽結(jié)晶造成對(duì)色譜柱和儀器系統(tǒng)的損壞。 正相色譜柱比反相色譜柱需要更長(zhǎng)的平衡時(shí)間。
樣品制備
1、 樣品應(yīng)當(dāng)盡可能溶解在能與流動(dòng)相相互溶的溶劑中。除特殊指明外，如使用強(qiáng)溶劑溶解樣品柱子的分辨率將可能降低。
2、 樣品溶液在進(jìn)樣前應(yīng)使用針頭式過(guò)濾器對(duì)樣品預(yù)先過(guò)濾。頻繁改變流動(dòng)相組成，會(huì)加速降低柱效。
3、 色譜柱由高壓勻漿法裝填，能承受較高壓力。為獲得最佳分離效果，使用時(shí)請(qǐng)不要超過(guò) 200kgf， 而且避免壓力突然上升或變化，否則會(huì)造成硅膠填料的破壞，減少色譜柱的使用壽命。除特殊要求外最高操作溫度不要超過(guò) 60℃。
保存操作
1、 如果流動(dòng)相含有酸或無(wú)機(jī)鹽， 應(yīng)當(dāng)先用去離子水(20 倍柱體積) 沖洗干凈。 然后用用 100%乙腈或甲醇保存色譜柱。 最后用柱子的接頭密封， 并放在穩(wěn)定的環(huán)境中存放。
2、 應(yīng)避免色譜柱受到直接的機(jī)械沖擊或摔落， 避免造成色譜柱性能的降低。
色譜柱的再生：
用相當(dāng)于 20 倍柱體積的溶劑按下列順序沖洗柱子， 建議按柱子的箭頭方向沖洗， 盡可能不反沖。沖洗時(shí)使用的的參考溶劑順序是水、甲醇、氯仿、異丙醇。
注意事項(xiàng)
色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要，稍有不慎就會(huì)降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過(guò)程中， 需要注意下列問(wèn)題，以維護(hù)色譜柱。
?、?避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。 溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況; 柱壓的突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料， 因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行， 在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過(guò)緩。
② 應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成， 特別是反相色譜中，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬?，反之亦然?/p>
?、?一般說(shuō)來(lái)色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì)迅速降低柱效。
?、?選擇使用適宜的流動(dòng)相(尤其是 pH)，以避免固定相被破壞。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時(shí)， 預(yù)柱為硅膠， 可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
?、?避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi)， 需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。
?、?經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱， 清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。 在進(jìn)行清洗時(shí)， 對(duì)流路系統(tǒng)中流動(dòng)相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過(guò)渡，每種流動(dòng)相的體積應(yīng)是柱體積的 20 倍左右，即常規(guī)分析需要 50~75ml。
